Иммуногистохимия при раке

В патоморфологической лаборатории «Герцлия Медикал Центр» при необходимости осуществляются иммуногистохимические исследования.

Что такое иммуногистохимия (ИГХ), или иммуногистохимическое окрашивание?

В основе исследования методом ИГХ лежит реакция антиген-антитело, причем оценивается не только наличие на срезе ткани определенных антигенов/белков, но и их локализация и количество.

Биопсийный или операционный материал после дополнительных этапов фиксации заливают парафином, получают гистологические блоки; затем с помощью микротома изготовляют срезы и помещают их на гистологические стекла.

Лишь после этого производится поэтапная окраска: по окончании каждого этапа врач-патоморфолог изучает срез с помощью микроскопа и решает, нужен ли следующий этап окраски.

Для ИГХ пригодны как свежие срезы, так и давнишние, приготовленные из парафиновых блоков за несколько лет до анализа.

Самый распространенный метод окрашивания — гематоксилин-эозиновый: в качестве красителей используются гематоксилин (окрашивает ядро клетки в темно-синий цвет) и эозин (окрашивает цитоплазму клетки в розовый).

Спрос на иммуногистохимические исследования для уточнения диагностики растет с каждым годом – причем увеличивается как количество случаев, так и число биомаркеров, тестируемых в каждом случае.

Для чего используется ИГХ?

Непосредственная цель иммуногистохимического окрашивания – охарактеризовать клетки по их иммунному профилю. Эта оценка имеет принципиальное значение для достижения дальнейших практических целей — уточнения диагностики, установления источника метастаза (тканевой и/или органной принадлежности первичной опухоли, выявление первичного очага поражения), дифференциальной диагностики ходжкинских и неходжкинских лимфом, прогноза эффективности лучевой терапии и тех или иных лекарственных препаратов (включая препараты таргетной терапии, а также химические и гормональные). Так, например, в некоторых случаях задача исследования – выявить наличие или отсутствие в опухоли рецепторов стероидных гормонов (эстроген, прогестерон), а также определить процент опухолевых клеток с наличием таких рецепторов (т.е. процент так называемых гормонопозитивных клеток).

Безусловно, в применении тех или иных методов иммуногистохимического окрашивания наибольший удельный вес принадлежит онкоморфологии. Так, положительные результаты теста на определенные маркеры – например, выявление экспрессии HER2/NEU при раке груди или желудка (подробнее об этом пойдет речь ниже), экспрессии c-kit в стромальных опухолях желудочно-кишечного тракта, — позволяют назначить эффективную терапию, или, напротив, отвергнуть заведомо бесполезную. С помощью иммуногистохимического исследования определяют также степень злокачественности опухоли, а это имеет немаловажное практическое значение при выборе тактики лечения.

Вместе с тем, иммуноморфологические исследования успешно применяются и при широком спектре заболеваний неопухолевой природы. При этом используются различные методы окрашивания. Приведем несколько примеров.

Прямая иммунофлуоресценция (ПИФ, по-английски DIF- Direct Immuno-Fluorescence) применяется для выявления различных аутоиммунных заболеваний, таких как обыкновенная (вульгарная) пузырчатка (Pemphigus Vulgaris) и буллёзный пемфигоид (Bullous Pemphigoid), а также почечных патологий, таких как первичная нефропатия IgA-типа (болезнь Бергера) и мембранный гломерулонефрит (диффузная мембранозная гломерулопатия). ПИФ выполняется на срезах замороженных тканей.

Методом гибридизации in situ пользуются для выявления вирусов, таких как цитомегаловирус (CMV) и вирус Эпштейна-Барра (EBV). Гибридизация in situ выполняется на парафиновых срезах.

ИГХ и HER2 статус рака молочной железы

В принципе существует 4 метода установления HER2 статуса рак молочной железы: иммуногистохимия, SPoT-Light HER2 CISH (хромогенная in situ гибридизация), Inform HER2 Dual ISH (ISH – гибридизация in situ)  и FISH (флуоресцентная гибридизация in situ). Исследования проводятся на биоптатах или операционном материале.

Как уже было сказано, ИГХ определяет количество протеина HER2 в опухолевых клетках с помощью окраски. Экспрессия оценивается визуально по шкале от 0 до 3+, всего приняты 4 градации.

0: HER2 — отрицательный РМЖ
+ или 1+: HER2 — отрицательный РМЖ; в то же время, повторный тест каким-либо из вышеперечисленных методов может быть целесообразен.
++ или 2: пограничный результат. Обязательна повторная проверка с помощью других вышеперечисленных тестов.
+++ или 3++: HER2 – положительный РМЖ.

По статистике 75% случаев характеризуются HER2 – отрицательным статусом, 25% — HER2 – положительным. Во втором случае речь идет о более агрессивном опухолевом процессе, однако блокирование HER2 с помощью таких препаратов как Герцептин (Herceptin, гуманизированное моноклональное антитело к HER-2/neu) или Тайкерб (Tykerb) / Тайверб (Tyverb – другое торговое название того же лекарства) может замедлить или даже остановить рост опухоли и значительно улучшить прогноз. В то же время, названные препараты токсичны для сердца, поэтому их назначают только при подтвержденном HER2 – положительном статусе рака молочной железы. Следует учитывать и то, что положительный статус со временем может преобразоваться в отрицательный.